1. 概要: ビウレット法とは
   • ビウレット法の長所と短所
2. ビウレット法のプロトコール

概要: ビウレット法とは

ビウレット法は、ペプチド結合と銅イオン Cu(II) の反応を利用したタンパク質濃度の定量法である。

トリペプチド以上のペプチドまたはタンパク質を、Cu(II) を含む溶液とアルカリ条件下で混合すると、含まれる 窒素 原子がCu(II) を Cu(I) に還元する (2)。この Cu(I) の呈色を 540 nm 吸光度で測定する。

ビウレット反応の溶液は、以下のような紫色を呈する (3)。

ビウレット法の長所と短所

ビウレット法には、以下のような特徴がある (2)。

長所

• ペプチド結合を検出するため、アミノ酸組成に影響を受けない。

短所

• 定量範囲は 5 – 160 mg/mL であり (2)、他の方法と比較すると検出感度がかなり低い。この点を改良したのが ローリー法 であり、ローリー法をさらに改良したのが BCA 法 である。
• トリス、アミノ酸、スクロース、アンモニアイオンが発色反応に影響を与える (2)。
• 廃液に重金属である銅が含まれる。

References

1. Amazon link: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition Cold Spring Harbor Laboratory Press.
2. 鈴木 2018a (Review). 総タンパク質の定量法. ぶんせき.
3. Ozone aurora/Philip Evans - <span class="int-own-work" lang="ja">投稿者自身による作品</span>, CC 表示-継承 3.0, リンクによる

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