タンパク質濃度測定・ビウレット法:
原理、プロトコール、長所と短所など

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2018/12/11 更新


  1. 概要: ビウレット法とは
    • ビウレット法の長所と短所
  2. ビウレット法のプロトコール

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概要: ビウレット法とは

ビウレット法は、ペプチド結合と銅イオン Cu(II) の反応を利用したタンパク質濃度の定量法である。

トリペプチド以上のペプチドまたはタンパク質を、Cu(II) を含む溶液とアルカリ条件下で混合すると、含まれる 窒素 原子がCu(II) を Cu(I) に還元する (2)。この Cu(I) の呈色を 540 nm 吸光度で測定する。


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ビウレット法の長所と短所

ビウレット法には、以下のような特徴がある (2)。

長所

  • ペプチド結合を検出するため、アミノ酸組成に影響を受けない。

短所

  • 定量範囲は 5 – 160 mg/mL であり (2)、他の方法と比較すると検出感度がかなり低い。この点を改良したのが ローリー法 であり、ローリー法をさらに改良したのが BCA 法 である。
  • トリス、アミノ酸、スクロース、アンモニアイオンが発色反応に影響を与える (2)。
  • 廃液に重金属である銅が含まれる。

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References

  1. Amazon link: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition Cold Spring Harbor Laboratory Press.
  2. 鈴木 2018a (Review). 総タンパク質の定量法. ぶんせき.