260 nm 法による DNA 濃度の測定
UBC/experiments/dna/A260_concentration
このページの最終更新日: 2025/01/22
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概要: 260 nm 法による DNA 濃度の測定
核酸 nucleic acid の一種である DNA や RNA は、波長 260 nm の光を吸収する性質がある。これを利用して、溶液中の核酸濃度を求めることができる。
タンパク質を構成する アミノ酸 のうち、チロシン と フェニルアラニン は 280 nm の光を吸収する。したがって、260 nm と 280 nm 吸光度の比をとることで、核酸溶液にタンパク質がコンタミしていないか (溶液の純度) を知ることができる。これについては、A260/280 DNA 純度 のページにまとめた。
原理
一般に、
- 二本鎖 DNA なら 約 50 µg/mL
- 一本鎖 DNA なら 約 33 µg/mL
- RNA なら約 40 µg/mL
この値をもとに、吸光度から溶液の核酸濃度を算出できる。
ただし、実際には核酸に含まれる塩基 A, T, C, G はそれぞれ異なる吸収スペクトルをもっている。したがって、厳密には DNA の配列まで考慮に入れる必要があり、配列の影響は短い DNA でとくに大きい。
図 (文献 2) は DNA の吸収スペクトル。
注意点など
エチレンジアミン四酢酸 (EDTA) には、260 nm の吸光がある (4)。DNA 溶液の溶媒としてよく用いられる TE buffer は EDTA を含むため、きちんと TE でブランクをとらないと、DNA 量を過大評価することになる。
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References
田村 (2014). 改訂版 バイオ試薬調製ポケットマニュアル.
リンク
- By Vossman - Own work, CC BY-SA 4.0, https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=38479001.
Koetsier and Cantor. A practical guide to analyzing nucleic acid concentration and purity with microvolume spectrophotometers. New England Biolabs.- 核酸の検出と定量（A260/280 比）. Link: Last access 2025/01/22.
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