1. 概要: アクリジンオレンジとは
2. アクリジンオレンジによる核酸の染色
3. アクリジンオレンジによるリソソームの染色とオートファジー検出

概要: アクリジンオレンジとは

アクリジンオレンジ acridine orange は、以下のような構造をもつ色素である (Public domain)。複数の性質があるので、組織染色、フローサイトメトリーなど多くの実験で使われている (1)。

使用条件は 5 mg/mL、30 分とか。

アクリジンオレンジによる核酸の染色

アクリジンオレンジは、核酸 nucleic acid に結合する。結合する分子によって蛍光波長が異なる ので、細胞周期の観察に使われる。mRNA damage の測定に使われている例もあるようだ (3)。

Ar レーザーで励起すると、DNA と RNA の同時観察が可能である。

アクリジンオレンジによるリソソームの染色とオートファジー検出

アクリジンオレンジは、リソソームなどの酸性部位 acidic compartment に入り込む性質がある。そのため、low pH vesicle (基本的にはリソソームのこと) の検出にも使われる。

この場合、一本鎖 DNA に結合したときと同様に、青色で励起され、赤色の蛍光を発する。

したがって、アクリジンオレンジ染色した組織を青色で励起すると、二本鎖 DNA 結合による green と、リソソーム結合による red が同時に観察される。つまり green/red の比をとればリソソームが増えているかどうかがわかり、これは オートファジー autophagy を検出する一般的な方法の一つである。

References

1. 同仁堂ウェブサイト. Link: Last access 6-17-2017.
2. Darzynkiewicz 1990a. Differential staining of DNA and RNA in intact cells and isolated cell nuclei with acridine-orange. Methods Cell Biol 33, 285–298.
3. Mosadegh et al. 2017a. Nicotine-induced damages in testicular tissue of rats; evidences for bcl-2, p53 and caspase-3 expression. Iran J Basic Med Sci 20, 199-208.

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