リゾチーム (Lysozyme): 細菌を溶解する酵素
UBCprotein_gene/l/lysozyme
このページの最終更新日: 2024/02/14- 概要: Lysozyme とは
- 大腸菌溶解のプロトコール
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概要: リゾチームとは
この分子が長い間苦手だったのだが、その理由は英語のライソザイム lysozyme [l
Lysozyme は EC 3.2.1.17 の酵素 enzyme であり、正式名は N-アセチノレムラミドグリカノヒドロラーゼという (1)。
ムコ多糖、ムコベプチドまたはキチン中の N-アセチルムラミン酸と 2-アセチルアミノ-2-デオキシ-D-グルコース間の β-1→4 結合を加水分解する。結果として細菌を溶解させる作用を示し、バクテリアからのタンパク質の抽出によく用いられる。
大腸菌溶解のプロトコール
大腸菌を遠心分離で回収後に、以下の手順でタンパク質を抽出することができる (2)。
- 培養液の 1/20 量の Lysis バッファーで速やかに懸濁する。
- 1/50 量のリゾチーム溶液を添加し、氷上で 30 分穏やかに撹拌する。
- 1/50 ~ 1/10 容量の 10% Triton X-100 を加え、4°C でさらに 20 分撹拌する。
- 12,000 × g, 30 min の遠心で得られた上清を回収する。
それぞれの緩衝液 buffer の組成は、Lysis バッファー [50 mM Tris-HCl or Phosphate, 150 mM NaCl, 1 mM PMSF, pH8.0]、リゾチーム溶液 [10 mg/ml リゾチーム in 20 mM Tris-HCl, pH8.0] である。
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References
- Amazon link: 岩波 理化学辞典 第5版: 使っているのは 4 版ですが 5 版を紹介しています。
- GE ヘルスケア. タンパク質の抽出・細胞破砕法. Link.
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