免疫染色: 原理、プロトコール、注意点など

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2018/05/28 更新


  1. 概要: 免疫染色とは

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概要: 免疫染色とは

抗体 antibody を用いて、目的とする タンパク質 を染色する方法を 免疫染色 immunostaining という。

免疫染色を行う場合、以下のような点を検討する必要がある。

  • 組織の形態、固定: ホールマウントか切片か、切片なら凍結か、パラフィンか
  • 抗体の選定: 反応性、特異性
  • 検出: 蛍光検出、DAB などによる検出

留意すべきことは以下の 3 点である。

  1. 目的タンパク質の抗原性の保持 (抗体に結合できる状態が保たれているかどうか)
  2. 目的タンパク質の発現部位の保持 (他の場所に移動していないかどうか)
  3. 組織の形態の保持

組織の固定法によって、以下のような違いがみられる (1)。

  1. 未固定凍結: 抗原性がよく保持されるが、形態の保持が悪い。
  2. 固定凍結: 抗原性、形態ともによく保持される。
  3. パラフィン: 形態保持に優れるが、抗原性の保持が悪い。パラフィン切片に使用可能な抗体を選んで使う。標本は常温で保存が可能である。

アルデヒド系で固定すると、低分子の不溶化や形態保持に優れるが、タンパク質やペプチドの抗原保持に難点がある。

有機溶剤は脱水作用があり、これで固定すると組織が収縮してしまう可能性がある。高分子の抗原保持に優れる。

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References

  1. 蓮井 2012a. 免疫組織化学の基礎と応用. V. 組織・細胞の固定. 鹿児島大学レポジトリ. Link.