細胞培養の概要と目次

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細胞培養に関する上位のページです
2018/06/29 更新

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  1. 細胞培養に関するデータ集、便利な数字
    • ディッシュ、フラスコなどの細胞数
    • 組織量との対応
    • メタボローム解析必要量
  2. 顕微鏡: 位相差顕微鏡、微分干渉顕微鏡
  3. Biosafely level
  4. トラブルシューティング

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細胞培養に関するデータ集、便利な数字

ディッシュ、フラスコなどの細胞数

Life Technologies のページに,HeLa 細胞についてのデータがある (1; 日本語のページは 2)。一部を転載しておく。

Surface area でほぼ数字が決まること,細胞の種類によってこの数字は変わりうることに気をつける。

Surface area (cm2)

Seeding density

細胞数 (confluent)

培地量 (ml)

35 mm dish

9 0.3 x 106 1.2 x 106 2

6 well plate

9 0.3 x 106 1.2 x 106 3 - 5

T-75 flask

75 2.1 x 106 8.4 x 106 8 - 15

組織量との対応

GE Healthcare の illustra tissue and cells genomic Prep Mini Spin Kit のページ (3) では,組織および培養細胞からの DNA 収量について以下のようなデータが載っている。一部を抜粋する。

大まかに 5 x 106 培養細胞 = 10 cm dish 1 枚 = 肝組織 10 mg 程度というオーダーで考えて良いだろう。


サンプル 組織 培養細胞
サンプル量 5 - 50 mg 動物組織 5 x 106 培養細胞
典型的収量

0.5 - 1.5 μg DNA/mg (=5 - 15 μg DNA/10 mg 組織)

ラット肝細胞でのデータ

10 - 20 μg DNA(5 x 106 細胞より)

メタボローム解析必要量

Human Metabolome Technologies 社では,メタボローム解析の受託を行っている。その ウェブサイト に,1 検体として必要な試料量の目安が載っていたので,これも一部を転載する。

代謝産物の場合でも,10 cm dish 1 枚が数十 mg の組織に相当すると考えて良さそうだ。

試料タイプ 1 検体に必要な試料量
血液 > 120 μl
組織(肝臓,骨格筋)

30 - 50 mg

培養細胞(HepG2 など), 浮遊細胞(CHO など)

2 - 5 x 106 cells

大腸菌

1 x 109 cells


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Biosafety level

ヒトおよび霊長類の細胞は、実験者に感染可能な病原体 (ウイルス、バクテリア) のキャリアとなりうるため、扱いには特別な注意が必要である。

細胞を販売している ATCC (American Type Culture Collection) は、すべての human cell line を HIV (see AIDS) と同様のレベルで扱うことを推奨している (5)。

多くの大学では、CDC Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) という ガイドライン に準拠して biosafety level を定めているようである。Appendex H に "Human and other primate cells should be handled using BSL-2 practices and containment" という表現がある。

ただし、この should be という表現自体が "Recommended Practices" というセクションの中にあり、recommendation に過ぎないという解釈もできる。どのルールに法的拘束力があるのか、まだ信頼できる文献を発見できていない。


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References

  1. Life Technologies website; Useful numbers for cell culture. Web.
  2. 細胞培養する人のための"使える"数字まとめ. Web.
  3. GE Healthcare, illustra tissue and cells genomic Prep Mini Spin Kit. Web.
  4. Human Metabolome Technologies, 測定に必要な試料量. Web.
  5. UT Austin, Human Cell Lines. Link: Last access 2018/04/17.